· поліакриламідГель повинен за допомогою акриламідного мономеру, вихідного матеріалу, каталізатора та права солі та буферної суміші разом.
· акриламіді біс (n, n '- метиленовий подвійний акриламід)- це гелева матриця мономерної форми.
· Персольфат амонію Почніть процес полімеризації клею. Порядок клею вимагає 10% розчину перулфату амонію, приготованого у воді. Більшість інформації вказували на потребу в активному використанні. Однак 10% розчину можна розміщувати на 4 ℃ протягом декількох тижнів без значної втрати активності. Складіть до 10 мл і відкиньте, коли клей не вдається.
Порада: відсотокакриламідУ послідовності клею та білкового клею не є однаковим. Якщо ви використовуєте попередній акриламід: BIS -рішення, обов’язково отримайте потрібну пляшку.
· Emed (n, n, n ', n'- тетраметил етилендіамін)- каталізатор, у коричневій пляшці, розміщеній у холодильнику. Додайте безпосередньо перед заливанням клею.
· Поліакриламідний електрофорез, що використовується склом в електрофорезі, слід промивати до і після кожного разу. Після електрофорезу мийте м’якою щіткою та тканиною в гарячій мильній воді, промийте дистильованою водою і висушіть.
· Волога і пил можуть викликати при порожнистому полімеру. Перед електрофорезом очистіть скляну тарілку за допомогою скляного очищувача і протріть її м’якою щіткою. Вимийте дистильованою водою і ретельно висушіть паперовою серветкою. Промивання з 70% етанолу перед витиранням паперу допомагає очистити та прискорити висихання. Додайте зразки акриламіду послідовно: біс, вода, буферний розчин, перулфат амонію, обкладені. Добре струсіть і налийте негайно.
Не потрібно дегазувати поліакриламід перед полімеризацією. (Акриламід, який використовувався для розміщення у вакуумі для видалення бульбашок, оскільки кисень гальмує полімеризацію.)
Поради для зразка горизонтальної клею.
· Покладіть шматок чорного паперу в нижній коробці, чорний фон, щоб зробити якийсь отвір для зразків, щоб чіткіше побачити.
· Клей -наповнений резервуар буфер, трохи над колоїдом.
· Якщо край має світло, увімкніть світло, дайте світлу сяє колоїдом. Намалюйте зразок у піпетку.
· Використання автоматичного піпетального пристрою.
· У 10-200 MU 1 точка руху рідини може використовуватися в більшості точок на зразку. Для дуже невеликих отворів для зразків (менше 10 мк1) довга головка піпетки, що використовується для секвенування клею, зручніша.
· Піботінг просто занурений у зразок, вдихаючи повільно рухається рідина. Зразок може здатися липким з гліцерином, а швидке відкачування може втягнути бульбашки повітря в головку піпетки.
· Зразки після вдихання піпетної головки, обережно переміщуть голову рідини на край труби або витирання паперу висмоктують рідку головку поза крапельками. Будьте обережні, щоб не смоктати зразок.
Помістіть зразок в отвір для зразка
· ПІПЕТНИЙ Пристрій, щоб зберегти невеликий тиск, зробіть зразки трохи переміщувати переповнення рідкої головки.
· Головка піпетки, вставлена в буфер, трохи вище, ніж точкові отвори, підтримують позитивний тиск. Кінчик піпетки можна вставити в невеликий отвір.
· Повільно і неухильно виходить зразки. Наконечник піпетки розміщується над отвором для пробного зразка, а зразок зануриться в отвір. Нехай зразок опускає, щоб заповнити отвір для зразка замість того, щоб натиснути.
· Після того, як остання крапля зразка з рідкою головкою, рідина буде рухатися до другої ноги, повільно піднімає рідину, рухається з буфера
Як зробити вибірку вертикального клею?
· Вертикальні отвори для зразків клею, утворені між двома шматками скла. У дуже тонкому клеї головку піпетки навіть не можна вставити між двома скляними пластинами. Дивіться гліцерин! Покладіть піпетку на отвір для зразка, і зразок зануриться в отвір.
· Покір з точкою раніше, обов’язково поставте вертикальну точку отвору для зразка поліпропіленного гелю промивають чистим. Вимити неполімеризований акриламід та воду, яка може з’явитися на дні отвору для зразка. Вода може зробити отвір для проби значно меншим. Використовуйте шприц 25 мл або 50 мл та голку 18-ти калібру. Налийте в буфер електрофорезу і обережно промивати отвір для зразка.
· Це може бути важко побачити отвір для зразка, але в той же час решта легко. Якщо є надлишки отворів, буфер зразків можна перевірити за допомогою бромофенолу синього.
Час посади: 31-2023