· поліакриламідгель повинен бути акриламідним мономером, вихідним матеріалом полімеризації, каталізатором і правильною сумішшю солі та буфера разом.
· акриламіді BIS (N, N'- метилен подвійний акриламід) є мономерною формою гелевої матриці.
· персульфат амонію запускає процес адгезивної полімеризації. Для рецептури клею необхідний 10% розчин персульфату амонію, приготовлений на воді. Більшість інформації вказувала на необхідність активного використання. Однак 10% розчин можна помістити при 4 ℃ протягом кількох тижнів без значної втрати активності. Доведіть до 10 мл і викиньте, коли клей не з’єднається.
Порада: відсотокакриламіду секвенуванні клей і білковий клей не одне і те ж. Якщо ви використовуєте готовий акриламід: розчин BIS, переконайтеся, що ви взяли правильну пляшку.
· ТЕМЕД (N, N, N ', N '- тетраметилетилендіамін) - каталізатор, в коричневій пляшці, поміщається в холодильник. Додайте безпосередньо перед заливкою клею.
· поліакриламідний електрофорез. Використане скло під час електрофорезу слід мити перед і після кожного разу. Після електрофорезу промийте м’якою щіткою та тканиною в гарячій воді з милом, обполосніть дистильованою водою та висушіть.
· вологість і пил можуть викликати порожнистий полімер. Перед електрофорезом очистіть скляну пластину засобом для миття скла та протріть м’якою щіткою. Промийте дистильованою водою та ретельно висушіть паперовою серветкою. Ополіскування 70% етанолом перед протиранням папером допомагає очистити та прискорити висихання. Послідовно додають зразки акриламіду: БІС, вода, буферний розчин, персульфат амонію, ТЕМЕД. Добре струсіть і негайно вилийте.
Немає необхідності дегазувати поліакриламід перед полімеризацією. (Раніше акриламід поміщали у вакуум, щоб видалити бульбашки, оскільки кисень перешкоджає полімеризації.)
Наконечники для зразків горизонтальних клейових точок.
· покладіть шматок чорного паперу в нижню коробку на чорному фоні, щоб зробити отвір для зразка, щоб було краще бачити.
· резервуар для клею, заповнений буфером, трохи поверх колоїду.
· якщо край має світло, увімкніть світло, нехай світло світить колоїдом. Наберіть зразок у піпетку.
· за допомогою автоматичного піпеточного пристрою.
· в 10-200 мкм 1 рухома точка рідини може бути використана в більшості точок зразка. Для дуже малих отворів зразка (менше 10 мкм) більш зручно використовувати довгу головку піпетки для секвенування клею.
· піпетування тільки що зануреного в зразок, вдихання повільно рухомої рідини. Зразок може виглядати липким від гліцерину, і швидке накачування може втягнути бульбашки повітря в головку піпетки.
· зразки після вдихання головкою для піпетування обережно рухатимуть рідинною головкою по краю труби або протираючим папером висмоктуватимуть рідинну головку за межі крапель. Будьте обережні, щоб не висмоктати зразок.
Помістіть зразок в отвір для зразка
· пристрій для піпетування, щоб підтримувати невеликий тиск, змусити зразки злегка переміщатися над головою рідини.
· головка піпетки, вставлена в буфер трохи вище точкових отворів, підтримує позитивний тиск. Кінчик піпетки можна вставити в маленький отвір.
· повільно і стабільно виходять зразки. Наконечник піпетки розміщується над точковим отвором для зразка, і зразок занурюється в отвір. Дайте зразку опуститися, щоб заповнити отвір для зразка, а не штовхати.
· після останньої краплі зразка з рідиною, рідина переміститься до другої ноги, повільно піднімайте рідину, рухайтеся, виходьте з буфера
Як зробити вертикальний відбір проб клею?
· вертикальні отвори для зразків точки клею, утворені між двома шматками скла. У дуже тонкому клеї головку піпетки неможливо навіть вставити між двома скляними пластинами. Слідкуйте за гліцерином! Помістіть головку піпетки над отвором для зразка, і зразок зануриться в отвір.
· точковий зразок перед тим, як поставити вертикальну точку поліпропіленового ацилгелю, отвір зразка промивається. Змийте неполімеризований акриламід і воду, які можуть з’явитися на дні отвору для зразка. Вода може значно зменшити отвір для зразка. Використовуйте шприц на 25 або 50 мл і голку 18 калібру. Додайте буфер для електрофорезу та обережно промийте отвір зразка.
· може бути важко побачити отвір для зразка, але в той же час все інше легко. Якщо є зайві отвори, буфер зразка можна перевірити бромфеноловим синім.
Час публікації: 31 березня 2023 р