· поліакриламідгель повинен бути акриламідним мономером, вихідним матеріалом полімеризації, каталізатором і правильною сумішшю солі та буфера разом.
· акриламіді BIS (N, N'- метилен подвійний акриламід) є мономерною формою гелевої матриці.
· персульфат амонію запускає процес адгезивної полімеризації.Для рецептури клею необхідний 10% розчин персульфату амонію, приготовлений на воді.Більшість інформації вказувала на необхідність активного використання.Однак 10% розчин можна помістити при 4 ℃ протягом кількох тижнів без значної втрати активності.Доведіть до 10 мл і викиньте, коли клей не з’єднається.
Порада: відсотокакриламіду секвенуванні клей і білковий клей не одне і те ж.Якщо ви використовуєте готовий акриламід: розчин BIS, переконайтеся, що ви взяли правильну пляшку.
· ТЕМЕД (N, N, N ', N '- тетраметилетилендіамін) - каталізатор, в коричневій пляшці, поміщається в холодильник.Додайте безпосередньо перед заливкою клею.
· поліакриламідний електрофорез. Використане скло під час електрофорезу слід мити перед і після кожного разу.Після електрофорезу промийте м’якою щіткою та тканиною в гарячій воді з милом, сполосніть дистильованою водою та висушіть.
· вологість і пил можуть викликати порожнистий полімер.Перед електрофорезом очистіть скляну пластину засобом для миття скла та протріть м’якою щіткою.Промийте дистильованою водою та ретельно висушіть паперовою серветкою.Ополіскування 70% етанолом перед протиранням папером допомагає очистити та прискорити висихання.Послідовно додають зразки акриламіду: БІС, вода, буферний розчин, персульфат амонію, ТЕМЕД.Добре струсіть і негайно вилийте.
Немає необхідності дегазувати поліакриламід перед полімеризацією.(Раніше акриламід поміщали у вакуум, щоб видалити бульбашки, оскільки кисень перешкоджає полімеризації.)
Горизонтальні наконечники для зразків клею.
· покладіть шматок чорного паперу в нижню коробку на чорному фоні, щоб зробити отвір для зразка, щоб було краще бачити.
· резервуар для клею, заповнений буфером, трохи поверх колоїду.
· якщо край має світло, увімкніть світло, нехай світло світить колоїдом.Наберіть зразок у піпетку.
· за допомогою автоматичного піпеточного пристрою.
· в 10-200 мкм 1 рухома точка рідини може бути використана в більшості точок зразка.Для дуже маленьких отворів зразка (менше 10 мк1) більш зручно використовувати довгу головку піпетки для секвенування клею.
· піпетування тільки що зануреного в зразок, вдихання повільно рухомої рідини.Зразок може виглядати липким від гліцерину, і швидке накачування може втягнути бульбашки повітря в головку піпетки.
· зразки після вдихання головкою для піпетування обережно рухатимуть рідинною головкою по краю труби або протираючим папером висмоктуватимуть рідинну головку за межі крапель.Будьте обережні, щоб не висмоктати зразок.
Помістіть зразок в отвір для зразка
· пристрій для піпетування, щоб підтримувати невеликий тиск, змусити зразки злегка переміщатися над головою рідини.
· головка піпетки, вставлена в буфер трохи вище точкових отворів, підтримує позитивний тиск.Кінчик піпетки можна вставити в маленький отвір.
· повільно і стабільно виходять зразки.Наконечник піпетки розміщується над точковим отвором для зразка, і зразок занурюється в отвір.Дайте зразку опуститися, щоб заповнити отвір для зразка, а не штовхати.
· після того, як остання крапля зразка з рідкою головкою, рідина переміститься до другої ноги, повільно піднімайте рух рідини, виходьте з буфера
Як зробити вертикальний відбір проб клею?
· вертикальні отвори для зразків точки клею, утворені між двома шматками скла.У дуже тонкому клеї головку піпетки неможливо навіть вставити між двома скляними пластинами.Слідкуйте за гліцерином!Помістіть головку піпетки над отвором для зразка, і зразок зануриться в отвір.
· точковий зразок перед тим, як поставити вертикальну точку поліпропіленового ацилгелю, отвір зразка промивається.Змийте неполімеризований акриламід і воду, які можуть з’явитися на дні отвору для зразка.Вода може значно зменшити отвір для зразка.Використовуйте шприц на 25 або 50 мл і голку 18 калібру.Додайте буфер для електрофорезу та обережно промийте отвір зразка.
· може бути важко побачити пробний отвір, але в той же час все інше легко.Якщо є зайві отвори, буфер зразка можна перевірити бромфеноловим синім.
Час публікації: 31 березня 2023 р